РАЗРАБОТКА СПОСОБА МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ FIV И FeLV ИНФЕКЦИИ
Реферат. Установлено, что вирусный иммунодефицит и лейкемия кошек широко распространены в г. Саратове и в Саратовской области. По полученным данным из числа обследованных бродячих животных FIV-позитивными оказались 50% кошек, а FeLV-положительными – 43%, сочетанное инфицирование обоими вирусами было выявлено у 33% обследованных животных. Среди клинически здоровых животных 9% показывали наличие в крови провируса FIV, возбудитель FeLV у них обнаружен не был. Среди животных с клиническими проявлениями FIV-носительство было установлено у 60% кошек, у 37% животных констатировали наличие FeLV, в 23% случаев у кошек регистрировали одновременно FIV-FeLV микст-инфекцию. В результате компьютерного анализа полногеномных сиквенсов и сиквенсов фрагментов провирусной ДНК и вирусной РНК возбудителей лейкемии и иммунодефицита кошек было установлено, что степень гомологии вирусных геномов составляет около 50%, при этом имеются незначительные по длине участки полного совпадения и обнаруживается значительная вариабельность в структуре отдельно взятых генов. Наиболее консервативной областью у FeLV был определен фрагмент, располагающийся вначале гена gag-pol, а у FIV наиболее стабильной явилась область в терминальной части гена gag. Был осуществлен дизайн праймеров к консервативным участкам вирусных геномов, разработан состав смеси для проведения мультиплексной ПЦР, отработаны условия постановки реакции. На разработанный способ получен патент № 2586504, опубликованный 10.16.2016 (бюл. № 16). Способ является доступным по стоимости, достоверным, высокочувствительным и высокоспецифичным методом выявления фрагментов провирусной ДНК вирусов иммунодефицита и лейкемии кошек в лимфоцитах крови животных в короткие сроки. Разработанный способ показал регулярную воспроизводимость с клиническим материалом. При этом компьютерный анализ свидетельствовал об отсутствии реакции на гомологичные и гетерологичные организмы.
Ключевые слова: кошки, диагностика, лейкемия, вирусный иммунодефицит, мультиплексная полимеразная цепная реакция.
Метки: Ветеринария и зоотехния