Сравнительная токсичность термовозгонных шашек «Вимал» и «Тамбей»

Категория: Ветеринария и зоотехния.

Реферат. В статье представлены результаты изучения острой токсичности двух ветеринарных препаратов на основе термовозгонной смеси – «Тамбей» и «Вимал». Действующее вещество препарата «Тамбей» – пихтовое масло, препарата «Вимал» – кристаллический йод. Путь введения препаратов ингаляционный. Препараты используются для дезинфекции ферм и лечения острых респираторных заболеваний крупного рогатого скота. Установлено, что острая ингаляционная токсичность препарата «Тамбей» при однократном введении составляет 98,0 мг/л, что в 76 раз ниже острой ингаляционной токсичности препарата «Вимал». При изучении субхронической токсичности препарата «Тамбей» в концентрациях 2 и 10 мг/л наблюдалось повышение уровня глюкозы с 5,1 до 6,0 и 6,3 ммоль/л; общего белка – с 64,2 до 88,2 и 86,5 г/л; мочевины – с 2,4 до 4,9 и 4,2 ммоль/л и креатинина – с 58,0 до 84,1 мкмоль/л у животных опытных групп по сравнению с показателями животных контрольной группы в зависимости от концентрации. Препарат «Тамбей» в указанных концентрациях незначительно снижает уровень тромбоцитов в крови. Выявленные изменения в биохимическом и общем анализах крови не являются критически важными, что подтверждается результатами наблюдений за динамикой веса, общим состоянием животных и проведенными гистологическими исследованиями. Токсических эффектов при курсовом применении препарата «Вимал» в концетрациях 0,063 и 0,127 мг/л в пересчете на йод не выявлено. Препарат «Тамбей» в концентрации 1 мг/л проявил угнетающее действие на горизонтальную двигательную активность крыс, уменьшив количество пересечений секторов с 35,3 в контроле до 18,7 в опыте и увеличил количество актов короткого груминга с 0,4 до 0,6 в тесте «Открытое поле». Результаты проведенных исследований помогут ветеринарам при целенаправленном выборе препарата для лечения и профилактики острых респираторных заболеваний животных.

Ключевые слова: ингаляционная острая и субхроническая токсичность, термовозгонные шашки, йод, пихтовое масло.

Лекарственные препараты «Ви­мал» и «Тамбей», представляющие собой термовозгонные шашки, используются для лечения и профилактики респираторных заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы, а также для дезинфекции животноводческих помещений в присутствии животных. Действие этих препаратов обусловлено свойствами входящих в состав шашек кристаллического йода и пихтового масла, обладающих широким спектром антимикробного и противогрибкового действия. Параметры безопасности этих препаратов позволят ветеринарным специалистам выбрать максимально эффективную лечебную тактику их использования. В статье представлен сравнительный анализ результатов исследования острой и субхронической ингаляционной токсичности препаратов «Вимал» и «Тамбей».

Материалы и методы исследований

Сравнительное изучение ост­рой, субхронической токсичности и раздражающего действия термовозгонных шашек с пихтовым маслом и йодом проводилось на базе Научно-образовательного центра химических и биологических исследований Пермского национального исследовательского политехнического университета. Исследования проведены в соответствии с нормативными документами [1, 14].   

В качестве объектов исследования были изучены препараты: термовозгонные шашки «Вимал» (действующее вещество – йод кристаллический) и «Тамбей» (действующее вещество – пихтовое масло) производства «Санветпрепарат-плюс» (г. Пермь). Содержание йода и пихтового масла в препаратах составляет 20 и 25% от массы шашки соответственно.

Острая токсичность. Экс­пе­рименты были поставлены на белых мышах линии CD-1. При изучении острой токсичности животные находились на стандартном рационе питания с использованием полнорационного гранулированного сухого корма для грызунов фирмы «Чара», вода в свободном доступе. При содержании животных соблюдался 12-ти часовой режим день/ночь. Температура воздуха в помещении 20–22°С, влажность 60–65%. Опыты на животных проводились в соответствии с утвержденным протоколом, с соблюдением правил гуманного обращения с животными. Острая токсичность оценивалась в соответствии с методическими рекомендациями [1].

Для изучения ингаляционной токсичности шашки с йодом препарат вводили ингаляционно, однократно в концентрациях 0,6; 0,8; 1,0; 1,3; 1,6; и 2,0 мг/л с использованием стандартной затравочной камеры. Опыты по изучению острой токсичности были поставлены на 85 животных. Животные находились в затравочной камере в течение 30 минут.

Диапазон исследуемых концентраций при изучении острой токсичности шашки с пихтовым маслом составлял от 80 до 140 мг/л. Животные находились в затравочной камере в течение 30 минут, в эксперименте было задействовано 54 животных [2].

При изучении острой токсичности препаратов продолжительность наблюдений за животными после «затравки» составляла 14 дней, фиксировались общее состояние животных и особенности поведения. Регистрировались сроки развития интоксикации и гибели животных. Проводилось макроскопическое исследование органов погибших животных.

Определение параметров острой токсичности осуществлялось с использованием методов Кербера и Беренса с определением значения CL50.

Субхроническая токсичность. Изучение субхронической токсичности йодной шашки проводилось на крысах линии WKY. Для изучения субхронической токсичности было использовано две концентрации препарата. Первая концентрация – 0,127 мг/л, что соответствует 1/10 от CL50; вторая концентрация – 0,063 мг/л в пересчете на йод, что превышает терапевтическую концентрацию в 3 раза. Исследование осуществлялось в течение 28 дней. Ингаляционное введение шашки проводилось в течение 14 дней. Время экспозиции животных в затравочной камере составляло 30 минут. Наблюдение за животными велось в ходе эксперимента и в течение 14 дней после завершения курса введения препарата согласно методическим рекомендациям [1]. Проводилась оценка его влияния на общее состояние животных, поведенческие реакции, потребление пищи и воды. Исследовали кровь и мочу. В крови определяли количество эритроцитов и лейкоцитов, СОЭ, лейкоцитарную формулу, а также ряд биохимических показателей. После эвтаназии осуществляли макроскопические и патогистологические исследования внутренних органов животных.

Исследование субхронической токсичности шашки с пихтовым маслом проводилось на крысах линии Wistar. Препарат исследовался в двух концентрациях: 10 мг/л, что соответствует 1/10 от CL50, и концентрации, превышающей терапевтическую в два раза, – 2 мг/л [2]. Время экспозиции составляло 30 минут.

Исследование длилось 14 дней. Ингаляционное введение шашки составляло 7 дней. Наблюдение за животными осуществлялось в ходе эксперимента и в течение 7 дней после завершения курса введения препарата согласно методическим рекомендациям [1]. Оценивалось общее состояние животных, особенности поведения, интенсивность и характер двигательной активности, изменение массы тела. На 8 и 14 дни эксперимента репрезентативно было выбрано по шесть животных из группы, получавшей шашку с пихтовым маслом, для проведения общего и биохимического анализов крови, анализа мочи и гистологических исследований. Взятие крови у животных осуществляли после 12-ти часового голодания из хвостовой вены в объеме 1,5 мл. Сбор мочи производили с использованием метаболических клеток TSE (Германия).

Эвтаназию животных проводили в CO2-камере. Визуальному осмотру подвергались: сердце, легкие, почки, печень, желудок, кишечник, тимус, матка и яичники/семенники. Выполнялось гистологическое исследование трахеи, легких, печени, почек и сердца. Материал для гистологического исследования фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Гистологическое исследование полученных образцов осуществлялось с использованием стандартного набора оборудования. Окраску препаратов проводили гематоксилином и эозином. Для микроскопического исследования гистологических препаратов использован микроскоп Axioimager A1 (ZEISS, Германия).

Вес тела животных определяли с помощью весов “Scout Pro” (США). Уровень гемоглобина определяли калориметрическим методом. Для определения количества эритроцитов использовали метод подсчета в камере Горяева, которую помещали под микроскоп “Micros” (Австрия) – объектив 8X, окуляр 10X или 15X. Для определения СОЭ кровь смешивали в соотношении 4 : 1 с физиологическим раствором хлорида натрия, содержащим цитрат натрия. Подсчет лейкоцитов проводили в камере Горяева. Для подсчета лейкоцитарной формулы крови мазки крови окрашивали по Романовскому – Гимзе. Подсчет клеток производили под микроскопом “Micros” с применением иммерсионного масла. Для подсчета тромбоцитов применяли метод Фонио. При исследовании биохимических показателей применяли микропланшетный ридер Infinite M1000 pro (Tecan group Ltd., Швейцария) с использованием стандартных наборов для биохимического анализа крови фирмы «Ольвекс Диагностикум» (Россия).

Для оценки влияния препаратов на ЦНС крыс был использован тест «Открытое поле» [3, 4]. В тесте «Открытое поле» регистрировались горизонтальная (ГДА) и вертикальная (стойки с опорой и без опоры) двигательная активность, груминг, исследование отверстий, дефекация и мочеиспускание.

Для всех количественных данных вычислялись среднее арифметическое (М), стандартная ошибка среднего (m). Полученные результаты обрабатывались с использованием программы GraphPad Prism 6 методом “Multiple t tests”. Различия считались достоверными при р ≤ 0,05.

Результаты исследований

Острая токсичность термовозгонных шашек «Тамбей» и «Вимал» определялась при ингаляционном пути введения. Концентрация препарата «Тамбей», вызывающая 50% гибели животных (CL50), – 98,0 мг/л; CL50 препарата «Вимал» – 1,28 мг/л.

При изучении субхронической токсичности шашек «Тамбей» и «Вимал» установлено, что при курсовом введении препаратов общее состояние животных опытных групп не изменялось в сравнении с животными контрольных групп. Шашки не влияли на функцию почек животных. При изучении действия на картину крови установлено, что препараты не оказывали влияния на количество эритроцитов, лейкоцитов, цветовой показатель, СОЭ и лейкоцитарную формулу крови животных. Снижение количества тромбоцитов в крови животных, получавших препарат «Тамбей» в концентрациях 2 и 10 мг/л, по сравнению с контролем не выходит за пределы физиологической нормы для белых крыс [5, 6].

Результаты изучения влияния исследуемого препарата «Тамбей» на биохимические показатели крови представлены в таблице 1.

Установлено статистически достоверное повышение уровня глюкозы, общего белка, мочевины и креатинина у животных опытных групп, получавших препарат «Тамбей», по сравнению с показателями животных контрольной группы.

При изучении субхронической токсичности препарата «Вимал» установлено, что различий в биохимическом анализе крови животных опытной и контрольной групп нет.

Результаты изучения действия шашки с пихтовым маслом на поведенческие реакции и двигательную активность крыс в тесте «Открытое поле» представлены в таблице 2. При изучении действия ингаляций шашки, содержащей пихтовое масло, на поведенческие реакции и двигательную активность в тесте «Открытое поле» установлено статистически достоверное уменьшение количества пересеченных секторов первого уровня при применении препарата в концентрации 1 мг/л по сравнению с контролем и увеличение количества актов короткого груминга при применении препарата в концентрации 10 мг/л.

Различия в индивидуальных показателях функционального состояния центральной нервной системы крыс обоего пола, получавших испытуемый препарат «Вимал», и аналогичных показателей для крыс в контрольных группах были оценены как недостоверные.

Морфометрический анализ и па­тогистологическое исследование внутренних органов животных, получавших препараты «Тамбей» и «Вимал», не показали влияния исследуемых препаратов на сердце, почки, печень и другие внутренние органы животных опытной группы в сравнении с контрольной.

При микроскопическом иссле­довании верхних дыхательных путей установлено, что препарат «Тамбей» в высокой концентрации (10 мг/л) обладает незначительным раздражающим действием. Препарат «Вимал» в концентрациях 0,127 и 0,063 мг/л в пересчете на йод раздражающим действием на верхние дыхательные пути не обладает.

Заключение

Острая токсичность исследовалась во временном интервале (30 мин), рекомендованном для лечения животных и дезинфекции помещений для содержания сельскохозяйственных животных и птицы препаратами «Тамбей» и «Вимал». Результаты изучения острой токсичности показали, что термовозгонная шашка «Тамбей» в 76 раз менее токсична, чем термовозгонная шашка «Вимал» (CL50 98,0 и 1,28 мг/л соответствен­но). При изучении субхронической токсичности уставлено, что препараты «Тамбей» и «Вимал» в исследуемых концентрациях не обладают токсическим действием. Биохимические показатели крови животных всех групп, получавших исследуемые препараты, находятся в пределах физиологической нормы для белых крыс, в которую укладывается незначительное увеличение общего белка, глюкозы, мочевины и креатинина у животных опытных групп, получавших препарат «Тамбей» [7–10].

Препарат «Тамбей» в концентрации, равной 1 мг/л, вызывает статистически достоверное снижение двигательной активности, в концентрации, равной 10 мг/л, увеличивает количества актов «короткого» груминга, что может быть связано со способностью пихтового масла влиять на уровень тревожности экспериментальных животных [11]. Действие на ЦНС, по-видимому, связано с входящим в состав пихтового масла α-пиненом [12, 13]. Этот эффект необходимо учитывать при применении препарата. Термовозгонная шашка «Вимал» действием на ЦНС не обладает. Результаты проведенных исследований помогут ветеринарам при целенаправленном выборе препарата для лечения и профилактики острых респираторных заболеваний животных.

ЛИТЕРАТУРА

1. Миронов А. Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств.  Часть первая. – М. : Гриф и К, 2012. – 944 с.
2. Изучение параметров безопасности шашки с пихтовым маслом / В. В. Маслова, Г. А. Люшина, С. Ю. Солодников, В. В. Литвинов, Н. А. Татарникова, Г. А. Терехин // Ветеринария. – 2016. – № 7. – С. 47–51.
3. Hall C. S. Emotional behavior in the rat. III. The relationship between emotionality and ambulatory activity // Journal comp. physiol. Psychol. – 1936. – Vol. 22. –
   Pp. 345–352.
4. Gould T. D. Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice // Neuromethods. – 2009. – No. 42. – Pp. 1–20.
5. Кудрявцев А. А. Гематология животных и рыб. – М. : Колос, 1969. – 320 с.
6. Nadzirah Md Said, Oduola Abiola. Haematological profile shows that Inbred Sprague Dawley rats have exceptional promise for use in biomedical and pharmacological studies // Asian Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences. – 2014. – No. 4(37). – Pp. 33–37.
7. Iba I. U., Etim O. E., Ebe N. U., Eghianruwa Q. A. Research article effect of subchronic administration of celecoxib, ibuprofen and aspirin on lipids and total protein levels of albino wistar rats // Akpanyung Asian Journal of Science and Technology. – 2014. – No. 5. – Pp. 761–762.
8. Activity of trypsin-like enzymes and gelatinases in rats with doxorubicin cardiomyopathy / Iu. A. Gordienko, Ya. V. Babets, A. O. Kulinich, A. I. Shvetsova, G. O. Ushakova // Ukr. Biochem. Journal. – 2014. – Vol. 86, No. 6. – Pp. 139–144.
9. Kalko K. O., Drogovoz S. M., Pozdniakova A. Yu. Circadian rhythm of albumin and total protein content in blood serum of intact rats and on the background of paracetamol hepatitis // Topical issues of new drugs development : Abstracts оf International Scientific And Practical Conference Of Young Scientists And Student. – Kharkiv, 2015. – P. 317.
10. Uhino S., Bellomo I., Goldsmith D. Personal Opinion: The meaning of the blood urea nitrogen/creatinine ratio in acute kidney injury // Clin Kidney Journal. – 2012. – No. 5. – Pp. 187–191.
11. Relationships of open-field behaviour with anxiety in the elevated zero-maze test: Focus on freezing and groo­ming / S. Díaz-Morán, C. Estanislau, T. Cañete, G. Blázquez, A. Ráez, A. Tobeña, A. Fernández-Terue // World Journal of Neuroscience. – 2014. – Vol. 4, No. 1. – Pp. 1–11.
12. Poaty B., Lahlah J., Porqueres F., Bouafif H. Composition, antimicrobial and antioxidant activities of seven essential oils from the North American boreal forest // World Journal Microbiol Biotechnol. – 2015. – No. 31. – Pp. 907–919.
13. Satou T., Kasuya H., Maeda K., Koike K. Daily inhalation of α-pinene in mice: effects on behavior and organ accumulation // Phytother. Res. – 2014. – No. 28. – Pp. 1284–1287.
14. Р 1.2.3156-13 Оценка токсичности и опасности химических веществ и их смесей для здоровья человека // Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. – М., 2014.

Метки: Ветеринария и зоотехния

• Назад
• Вперед